プロテオーム受託解析

二次元電気泳動受託解析サービスについて


二次元電気泳動法は、サンプルに含まれるタンパク質を1000個以上のスポットに分離する事も可能です。サンプル内に含まれるタンパク質を網羅的に解析し、差異のあるタンパク質を見つけます。  また、同一タンパク質であっても、翻訳後装飾(リン酸化など)の異なるタンパク質の分離・検出も行えます。
当社は二次元電気泳動装置の販売メーカーであり、国内で300を超えるユーザー様の実験にご利用頂いており、多くのユーザー様のサンプル解析をサポートした実績があります。
 

 



二次元電気泳動受託解析の流れ


STEP1:受託解析のお申し込み

受託解析のお申し込みは、WEB、もしくは、FAXにて、ご依頼下さい。担当者から受託解析の内容確認の連絡をさせて頂きます。
サンプルの抽出条件から、ご相談させて頂きます。
当社でサンプル抽出を行う場合の組成は、7M Urea、2M Thiourea、32.5mM CAHPS、0.1M DTT、2.5% Pharmalyte pH3-10 です。有償にて、サンプル抽出作業を行う事も可能です。

 

STEP2:二次元電気泳動解析

二次元電気泳動実験を行ったポリアクリルアミドゲルは、SYPRO Ruby(蛍光染色液)にて染色を行いまして画像撮影を行います。蛍光染色法は、微量なタンパク質スポットも検出可能で、質量分析解析でも良好な結果が得られます。
実験例:マウス肝臓サンプル

実験例:マウス肝臓サンプル

湿重量に対し4倍抽出液にて可溶化し、18ulにて実験した画像。
1次元目:18cm ゲルストリップ pH4‐7
2次元目:12.5% ポリアクリルアミドゲル
染色方法:SYPRO Ruby蛍光染色

撮影画像から最適な画像を使用して、二次元電気泳動画像解析ソフトウェア・SameSpots(Totallab社)を使用して解析作業を行います。
画像解析の結果から、2倍以上変動しているタンパク質スポット群を報告させて頂きます。

実験例:マウス肝臓サンプル

実験例:2倍以上変動しているタンパク質スポット群の位置と詳細情報

報告書に添付しますCD-ROMには、検出された全てのスポットの情報が閲覧できるデジタル情報があります。閲覧は、Windows PCのWEB閲覧ソフトウェアを使用します。また、全てのスポットのExcelデータもあります。

実験例:マウス肝臓サンプル

実験例:全てのスポットの拡大画像、ヒストグラム、数値情報が閲覧可能

左図のタンパク質スポットは、1.6倍の変化量ですので、通常の報告書には記載ありません。
ユーザー様の質量分析装置で解析を行う場合は、報告書と合わせて実験で取得したポリアクリルアミドゲルを返却致します。ポリアクリルアミドゲルは、蛍光染色のため、目視でタンパク質スポットを確認する事はできません。銀染色、または、CBB染色で再染色を行いますと目視化する事は可能です。有償にて、蛍光染色のポリアクリルアミドゲルから、目的スポットの回収作業を行う事も可能です。


STEP3:質量分析解析

蛍光染色のポリアクリルアミドゲルから、目的スポットの回収作業を行いまして、ハイブリッドフーリエ変換LC-MS/MS Q Exactive(Thermo Scientific社)などの優れた質量精度を誇る質量分析装置にて解析を行います。蛍光染色で薄くしか確認できないタンパク質スポットでも同定は可能です。
質量分析解析の結果は、Scaffoldソフトウェアを使用して、詳細情報を確認する事ができます。解析作業は米国にて行います。




 

二次元電気泳動受託解析サービスについて

 
サンプル
組織、培養細胞、血清、植物など、タンパク質が含まれる全てのサンプルにて受託解析 をお受けします。
サンプル抽出
有償にてサンプル抽出作業を行う事も可能です。
サンプル抽出作業費:¥5,000 / 1検体
実験仕様
一次元目 … 18cm イモビラインドライストリップ(GE社)にて pH4-7もしくは pH3-10NLより選択
二次元目 … 10.0%もしくは、12.5% ポリアクリルアミドゲルより選択
染色方法 … SYPRO Ruby(蛍光染色)
撮影 … フルオロホレスター3000 (600万画素冷却CCDカメラ
画像解析
二次元電気泳動画像解析ソフトウェア・SameSpots(Totallab社)にて解析。
変動しているスポットの中から2倍以上の差異のあるスポット情報を報告します。
また、全てのスポットの画像解析結果のデジタルデータ(CD-ROM)を報告します。
納期
約3週間
その他
有償にて、ProQ Diamond染色による、リン酸化タンパク質の変動解析を行う事も可能です。
補足事項
ご使用中の質量分析装置で解析を行う場合は、報告書と合わせて実験で取得したポリアクリルアミドゲルを返却します。 また、有償にてポリアクリルアミドゲルから目的スポットの回収作業を行う事も可能です。
注意
感染性のあるサンプルは取り扱いできません。
感染性が疑われる場合には不活性処理を行ったサンプルを送付ください。
定価
¥60,000 / 1検体


質量分析 LC-MS/MSサービスについて

 
解析内容
ハイブリッドフーリエ変換LC-MS/MS Q Exactive(Thermo Scientific社)などの質量分析装置にて解析を行います。解析作業は米国にて行います。
報告内容
Scaffoldファイルとデータファイル(Excel)を報告します。Scaffoldファイルは、Scaffoldソフトウェア(フリーソフトウェア)を使用して詳細情報が確認できます。
納期
約2週間
補足事項
ポリアクリルアミドゲルから、スポットを回収する場合は、別途にて費用が掛かります。
スポット回収費:¥5,000 / 1スポット
定価
¥100,000 / 1スポット
 


※ お問い合わせ等、記入頂いた個人情報は、細心の注意を払って厳重に管理いたします。
※ 本ページ上の情報は、Thermo Scientific社のホームページに掲載されている情報を引用しております。
※ カタログおよび、本ページ記載の定価には消費税は含まれておりません。